Amplicon là gì

  -  

Pcr là chuyên môn nhân bản AND thành đa số giống nhau, mặc dù nó chỉ có một hạn chế là không thể xác định thời gian thực trong quy trình phân bóc tách ADN. Do vậy nhưng một kỹ thuật mới được áp dụng để giải quyết và xử lý vấn đề này là phương pháp real time PCR.

Bạn đang xem: Amplicon là gì

RealTime PCR là phương pháp gì?

Kỹ thuật PCR thông thường, sản phẩm DNA khuếch tán hoặc amplicon, được phát hiện trong một phân tích điểm cuối. Trong PCR read time, sự tích trữ của thành phầm khuếch đại được đo khi quá trình phản ứng diễn ra, theo thời gian thực, cùng với định lượng hàng hóa sau mỗi chu kỳ.

Đầu tiên, các phản ứng khuếch tán được tùy chỉnh thiết lập với các thuốc demo PCR và các đoạn mồi hoặc tùy chỉnh. Các phản ứng kế tiếp được chạy trong những công cầm PCR thời gian thực cùng dữ liệu tích lũy được phân tích bằng phần mềm công cố kỉnh độc quyền.

Việc phạt hiện các đoạn and được nhân phiên bản PCR trong thời hạn thực được kích hoạt bằng cách đưa vào trong 1 phân tử phóng viên huỳnh quang trong những phản ứng để mang lại sự phạt huỳnh quang với con số DNA thành phầm ngày càng tăng. Những hóa chất huỳnh quang được áp dụng cho mục đích này bao gồm thuốc nhuộm kết nối DNA cùng mồi hoặc đầu dò quánh hiệu theo trình tự huỳnh quang.

*
 

Các quy trình nhiệt chuyên sử dụng được trang bị những môđun phát hiện tại huỳnh quang quẻ được thực hiện để theo dõi bộc lộ huỳnh quang khi khuếch đại xảy ra. Những huỳnh quang đo được tỷ lệ thuận với tổng con số của amplicon. Sự biến đổi huỳnh quang quẻ theo thời hạn được thực hiện để giám sát và đo lường số lượng amplicon được tạo thành trong từng chu kỳ.

Ưu điểm bao gồm của realtime PCR là chất nhận được bạn xác minh số lượng phiên bản sao lúc đầu của DNA mẫu với độ chính xác và độ nhạy cao trên phạm vi rượu cồn rộng. Công dụng Realtime PCR rất có thể là định tính (sự hiện hữu hay vắng khía cạnh của một chuỗi) hoặc định lượng (số bạn dạng sao). Định lượng RealtimePCR vị đó nói một cách khác là phân tích qPCR.

Ngoài ra, tài liệu qPCR thời hạn thực hoàn toàn có thể được reviews mà không có điện di gel, dẫn đến sút thời gian chờ đợi và tăng thông lượng. Cuối cùng, vì những phản ứng qPCR thời hạn thực được chạy và dữ liệu được nhận xét trong khối hệ thống qPCR thống nhất, khép kín, thời cơ giảm ô nhiễm và độc hại và nhu yếu xử lý postamplification được loại bỏ trong đối chiếu qPCR.

Xem thêm: Cục Phát Wifi Tenda Là Gì ? Có Những Tính Năng Gì? Cách Sử Dụng Ra Sao?

Những vận dụng của Realtime PCR

Các xét nghiệm PCR tuyệt qPCR thời gian thực đang trở thành công cụ được gạn lọc để xác định mau lẹ định lượng axit nucleic trong các mẫu sinh học khác nhau, với các ứng dụng đa dạng và phong phú như phân tích biểu hiện gen, phát hiện sinh vật biến hóa gen vào thực phẩm và kiểu ung thư .

Trong các phòng phân tách nghiên cứu, các xét nghiệm qPCR được sử dụng rộng rãi được cho phép đo định lượng số lượng sao chép gen (liều lượng gen) trong những dòng tế bào được đổi khác hoặc sự hiện nay diện của các gen đột biến.

Kết phù hợp với PCR phiên mã ngược (RT-PCR), các xét nghiệm qPCR hoàn toàn có thể được áp dụng để định lượng đúng chuẩn những thay đổi trong thể hiện gen, ví dụ, tăng hoặc giảm thể hiện để đáp ứng nhu cầu với những điều khiếu nại môi trường không giống nhau hoặc điều trị bởi thuốc. Nút mRNA.

Nguyên lý hoạt động của Realtime PCR

Để hiểu cách thức hoạt động của PCR thời hạn thực, mình sẽ minh họa một so với qPCR áp dụng một chính sách khuếch đại điển hình. Trong lấy ví dụ như này, số chu kỳ PCR được hiển thị trên trục x, cùng huỳnh quang từ bội phản ứng khuyếch đại, xác suất thuận với số lượng sản phẩm khuếch đại vào ống, được hiển thị trên trục y.

*
 

Ban đầu, huỳnh quang đãng vẫn ở tầm mức nền, cùng tăng huỳnh quang bắt buộc phát hiện tại được tuy nhiên sản phẩm tích lũy theo cấp cho số nhân. Cuối cùng, thành phầm khuếch đại đủ tích lũy để mang đến tín hiệu huỳnh quang phát hiện nay được. Số chu kỳ luân hồi mà tại đó vấn đề này xảy ra được điện thoại tư vấn là quy trình định lượng, hoặc C q . Vày giá trị C q được đo vào pha nón khi các thuốc thử ko giới hạn, qPCR thời gian thực rất có thể được sử dụng để tính toán đúng chuẩn số lượng mẫu lúc đầu có trong phản ứng dựa vào hàm mũ đã biết mô tả quá trình phản ứng.

Cq của một bội phản ứng được xác minh chủ yếu bởi con số mẫu xuất hiện tại sự ban đầu của phản ứng khuếch đại. Nếu như một lượng phệ mẫu xuất hiện khi ban đầu phản ứng, thì cần phải có ít chu kỳ luân hồi khuếch đại để tích lũy đủ thành phầm để tạo ra tín hiệu huỳnh quang đãng trên nền. Như vậy, phản ứng sẽ sở hữu mức thấp. Ngược lại, nếu một lượng nhỏ mẫu xuất hiện khi bắt đầu phản ứng, thì cần có thêm chu kỳ khuếch đại để biểu đạt huỳnh quang tăng lên trên nền. Như vậy, phản ứng sẽ có một cao, hoặc muộn, C q . Mối quan hệ này tạo đại lý cho khía cạnh định lượng của PCR thời hạn thực.

Xem thêm: Tai Ch Play Mien Phi - Google Play Cho Android

Việc sử dụng nguyên lý realtime pcr giúp có lại tác dụng cao hơn so với chuyên môn pcr thông thường. Tuy nhiên tùy trường phù hợp mà bạn nên lựa chọn cho bạn một chiến thuật thích hòa hợp nha.